纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型可吸收材料的短期生物安全性

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1279

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (22): 3530-3535.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1279

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纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型可吸收材料的短期生物安全性

高黎¹，王书岩¹，王蕊¹，许永华¹，高静静¹，张丽²，刘文涛²

¹郑州大学第一附属医院儿童口腔科，河南省郑州市 450001；²郑州大学材料科学与工程学院，河南省郑州市 450001

收稿日期:2019-03-15 出版日期:2019-08-08 发布日期:2021-04-28
通讯作者: 高黎，郑州大学第一附属医院儿童口腔科，河南省郑州市 450001
作者简介:高黎，女，1973年生，汉族，博士，副主任医师，主要从事儿童口腔龋病及生物学方面的研究。
基金资助:
河南省高等学校重点科研项目计划(17A320008)，项目负责人：高黎；河南省自然科学基金项目(182300410375)，项目负责人：高黎

Short-term biosafety of novel absorbable nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite

Gao Li¹, Wang Shuyan¹, Wang Rui¹, Xu Yonghua¹, Gao Jingjing¹, Zhang Li², Liu Wentao²

¹Department of Pediatric Dentistry, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, Henan Province, China; ²School of Material Science and Engineering, Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, Henan Province, China

Received:2019-03-15 Online:2019-08-08 Published:2021-04-28
Contact: Gao Li, Department of Pediatric Dentistry, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, Henan Province, China
About author:Gao Li, MD, Associate chief physician, Department of Pediatric Dentistry, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, Henan Province, China
Supported by:
The Key Scientific Research Project of Henan Higher Education Institutions, No. 17A320008 (to GL); the Natural Science Foundation of Henan Province, No. 182300410375 (to GL)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合材料：聚乳酸是一类可降解的高分子生物材料，具有良好的生物相容性、生物可降解性、无毒副作用、易加工成型，且降解产物能参与到人体的新陈代谢，但强度差，在降解过程中产酸易引起周围组织无菌性炎症，且X射线下不显影；纳米羟基磷灰石/胶原是具有模仿天然骨组成成分和分级结构特征的复合体，具有良好的生物活性和骨传导性，且无毒无免疫原性，但其脆性大，不易成型；两者的复合可提高纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合材料的相关性能，但其生物相容性和安全性还需深入探究。

生物安全性：是评价一种新生物材料性质的重要指标之一，是生物材料在临床应用之前必须进行的关键环节，是指材料与人体之间相互作用下必须对人体无毒性、无致敏性、无刺激性、无遗传毒性、无致癌性，对人体组织、血液、免疫系统无不良反应。

背景：课题组前期制备出具有良好生物活性的纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸[nano-hydroxyapatite/ collagen/poly(L-lactic)acid，nHAC/PLA]复合材料。

目的：评估纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料的生物安全性。

方法：取含聚乳酸分别为100，150，200 g/L的nHAC/PLA材料，制备浸提液，分别记为nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3。①细胞毒性实验：采用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液、细胞培养基培养L929 细胞，采用MTT比色法评价材料的细胞毒性；②急性全身毒性实验：取C57小鼠(郑州大学动物实验中心提供)，尾静脉分别注射nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液与生理盐水，注射后24，48，72 h，观察动物一般情况及体质量变化；③血清毒性实验：取SD大鼠(郑州大学动物实验中心提供)，分别胃饲nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液与生理盐水，7 d后，采用酶联免疫法检测大鼠血清中白细胞介素1蛋白水平；④致敏实验：将25只白色豚鼠(郑州大学动物实验中心提供)随机分为5组：实验组采用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液，阴性对照组采用生理盐水，阳性对照组采用体积分数5%甲醛溶液，经过皮内诱导、局部诱导和激发阶段后24，48，72 h，观察各组激发部位皮肤情况；⑤溶血实验：向nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液、生理盐水、蒸馏水中分别加入兔抗凝血，检测溶血率。实验方案经郑州大学伦理委员会审查批准。

结果与结论：纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料的体外细胞毒性为 0 级，急性全身毒性、血清毒性、致敏性和溶血实验结果均为阴性，表明纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸材料均具有良好的生物安全性。

ORCID: 0000-0002-1789-4907(高黎)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 纳米羟基磷灰石/胶原, 聚乳酸, 可吸收材料, 生物安全性, 细胞毒性实验, 急性全身毒性实验, 血清毒性实验, 致敏实验, 溶血实验

Abstract:

BACKGROUND: A novel nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite was manufactured in our preliminary experiments.

OBJECTIVE: To evaluate the biosafety of nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite.

METHODS: Nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite was prepared into three kinds of leaching liquor containing 100, 150 and 200 g/L poly(lactic acid), namely, nHAC/PLA1, nHAC/PLA2, nHAC/PLA3. (1) Cytotoxicity test: L929 cells were cultured with nHAC/PLA1, nHAC/PLA2, nHAC/PLA3 leaching liquor and culture medium and cell toxicity was evaluated using MTT assay. (2) Acute systemic toxicity test: nHAC/PLA1, nHAC/PLA2, nHAC/PLA3 leaching liquor and normal saline were injected into C57 mice (Laboratory Animal Center of Zhengzhou University, China) via the tail vein. At 24, 48, 72 hours after injection, the general situation of mice was observed and body weight was recorded. (3) Serum toxicity test: SD rats (Laboratory Animal Center of Zhengzhou University) were intragastrically administered nHAC/PLA1, nHAC/PLA2, nHAC/PLA3 leaching liquor and normal saline. Seven days later, serum level of interleukin-1 protein was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. (4) Skin sensitization test: 25 guinea pigs (Laboratory Animal Center of Zhengzhou University) were randomly treated with nHAC/PLA1, nHAC/PLA2, nHAC/PLA3 leaching liquor (experimental groups), normal saline (negative control group), and 5% formaldehyde (positive control group). At 24, 48 and 72 hours after intracutaneous induction, local induction, and provocation, skin sensitization reactions, including erythema and edema, were observed in each group. (5) Hemolysis test: anti-rabbit antibodies were added into the leaching liquor of test samples, saline and distilled water to determine the rate of hemolysis. The study was approved by Ethics Committee of Zhengzhou University, China.

RESULTS AND CONCLUSION: The in vitro cytotoxicity of nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite was graded 0. Negative results were obtained in acute systemic toxicity test, serum toxicity test, skin sensitization test, acute hemolytic test, and hemolysis test of nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite. These results suggest good biosafety of nano-hydroxyapatite/ collagen/poly(lactic acid) composite.

Key words: nano-hydroxyapatite/collagen, poly(lactic acid), absorbable material, biosafety, cytotoxicity test, acute systemic toxicity test, serum toxicity test, skin sensitization test, hemolysis test

中图分类号:

R459.9','1');return false;" target="_blank">
R459.9

R318.08

引用本文

高黎, 王书岩, 王蕊, 许永华, 高静静, 张丽, 刘文涛. 纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型可吸收材料的短期生物安全性[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(22): 3530-3535.

Gao Li, Wang Shuyan, Wang Rui, Xu Yonghua, Gao Jingjing, Zhang Li, Liu Wentao. Short-term biosafety of novel absorbable nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(22): 3530-3535.

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图/表（结果） 6

2.1 体外细胞毒性实验结果用DMEM培养基及nHAC/ PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3浸提液培养的L-929小鼠成纤维细胞在2，4，7 d时相对增殖率在100%-105%之间，均大于100%，因此3种nHAC/PLA材料细胞毒性分级均为0级，无细胞毒性，符合生物材料的应用要求。同一时间点各组间光吸收度值比较，差异无统计学意义(F=0.851，1.172和0.833，P =0.486，0.351和0.495)，见表2。

2.2 急性全身毒性实验结果  尾静脉注射实验组材料浸提液及生理盐水后，小鼠皮肤、黏膜未见异常，眼睑无下垂，小鼠进食、活动正常，无死亡、体质量下降、运动减少等不良反应。按毒性分级，nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3三种复合物属于无毒材料，各组间小鼠24，48，72 h体质量变化比较差异无显著性意义(F=0.355，0.458，2.279，P=0.786，0.715，0.119)，见表3。

2.3 血清毒性反应实验结果获取胃饲浸提液nHAC/ PLA1、nHAC/PLA2及nHAC/PLA3实验组与空白对照组的血清白细胞介素质量浓度分别为(18.254±0.740)，(18.874±1.043)，(17.728±0.531)，(18.180±1.035) ng/L，各组比较差异无显著性意义(F=1.488，P=0.256)。

2.4 致敏实验结果   豚鼠致敏去除刺激源后，实验组24，48，72 h腹部皮肤与阴性对照组皮肤反应一致，无红斑和水肿现象；阳性对照组刺激源24 h 后豚鼠腹部皮肤出现局部点状发红、水肿反应，48 h后皮肤红斑、水肿呈片状加重，焦痂出现，72 h后红斑、水肿进一步加重，呈重度焦痂状态，见图1-3。实验组与阴性对照致敏记分均为0分。因此，nHAC/PLA材料对豚鼠皮肤无致敏性。

2.5 溶血实验结果  nHAC/PLA材料溶血实验结果，见表4。实验中阳性对照组吸光度值为0.812±0.027，阴性对照组吸光度值为0.017±0.002，小于0.03，均符合实验要求。nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3浸提液的溶血率分别为3.7%，3.3%，3.8%，均小于5%，即认为nHAC/PLA材料无溶血反应，符合溶血实验要求。

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引言

聚乳酸是一类可吸收的高分子生物材料，在生物体内最终降解为小分子乳酸而参与机体新陈代谢，无毒副作用，生物安全性好，具有优越的临床应用性能。聚乳酸易加工成型，可与其他材料复合形成不同性能的聚乳酸复合物，以适用于临床的不同需要^[1-4]。纳米羟基磷灰石/胶原是具有模仿天然骨组成成分和分级结构特征的复合体，具有良好的生物相容性和骨传导性^[5-6]，无毒性及免疫原性，但脆性大，不易成型。目前，国内团队已将一定比例的聚乳酸与纳米羟基磷灰石/胶原复合，研制出具有良好生物活性的纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly(L-lactic) acid，nHAC/PLA]复合材料^[7]，用于组织工程骨架构建。牙齿与骨骼的基本成分相似，均是羟基磷灰石与胶原蛋白^[8]，因此课题组将不同比例的聚乳酸与纳米羟基磷灰石/胶原复合出新的可吸收材料nHAC/PLA，尝试用于临床乳牙生物可吸收根管桩的研制。复合物在加工或处理过程中都会存留一些小分子物质，可能会对机体产生不良影响；而生物安全性又是评价一种新生物材料性质极其重要的指标之一，是生物材料在临床应用之前必须进行的关键环节，因此首先对新研制材料进行生物相容性评价^[9-10]。此次研究参照ISO 10993-1标准对nHAC/PLA材料进行了细胞毒性、急性全身毒性、血清毒性、致敏性和溶血性等系统短期实验^[10]，评估其生物安全性。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计  体内、外观察实验。

1.2 时间及地点  实验于2017年1至10月在郑州大学第一附属医院重点实验室完成。

1.3 材料 L929小鼠成纤维细胞系由西安空军军医大学口腔组织工程中心提供。nHAC/PLA由郑州大学材料科学与工程学院制备，聚乳酸质量浓度分别为100，150，200 g/L，分别记为nHAC/PLA1，nHAC/PLA2，nHAC/PLA3。

实验动物：健康C57小鼠20只，雌雄对半，体质量18-25 g；健康雄性SD大鼠20只，体质量160-190 g；健康雄性新西兰白兔1只，体质量2.46 kg；健康白色雄性豚鼠25只，体质量300-500 g，实验动物均由郑州大学动物实验中心提供。

实验用主要试剂与仪器：α-DMEM 培养基、谷氨酰胺、青链霉素、胎牛血清(Gibco，美国)；0.05% typsin、TRIzol Reagent(sigma，美国)；平底96孔板；ELISA试剂盒人白细胞介素1(Sigma-Aldrich公司，美国)；细胞培养箱(Heraeus，德国)；酶联免疫检测仪(南京华东电子仪器厂)；分光光度计(Beckman，美国)；倒置相差显微镜、光学显微镜(Olympus，日本)。

1.4 实验方法

1.4.1 nHAC/PLA材料浸提液的制备   按照《中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价》要求，将nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3试样用PBS清洗，吹干，并经⁶⁰Co照射灭菌72 h后，置入无菌试管；按照试样表面积/浸提介质=3 cm²/mL，加入含体积分数5%胎牛血清的DMEM培养基，70 ℃浸提24 h^[11]，制得3种材料浸提液，4 ℃保存备用。

1.4.2 细胞毒性实验提取L-929小鼠成纤维细胞，用DMEM培养基配制细胞浓度为1×10¹⁰ L^-1的细胞悬液，以每孔100 μL接种于96孔板，使细胞生长同步化后，空白对照组用DMEM培养基交换；实验组分别用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3浸提液交换；共4组，每组6孔，37 ℃恒温培养箱中培养。2，4，7 d终止培养，每孔加入MTT(5 g/L)20 μL，培养4 h，吸净上清，加入150 μL DMSO制剂，震荡10 min，使结晶物充分溶解，酶联免疫检测仪测定波长490 nm时每孔的吸光度值(A值)，求均值并记录结果，计算细胞相对增殖  率^[12]。按照美国药典评价细胞毒性等级：相对增殖率≥100%，毒性0级；相对增殖率80%-99%，毒性1级；相对增殖率50%-79%，毒性2级；相对增殖率30%-49%，毒性3级；相对增殖率0%-29%，毒性4级^[13]。

1.4.3 急性全身毒性实验选用分笼饲养的8周龄健康C57小鼠20只，雌雄对半，随机分为4组，每组5只：实验组分别尾静脉注射nHAC/PLA1、nHAC/PLA2及nHAC/ PLA3浸提液50 mL/kg，对照组注射等量生理盐水，连续观察1周，观察小鼠一般状况、中毒及死亡情况，记录小鼠24，48，72 h体质量变化，并对材料进行毒性分级^[14]。观察指标及毒性评判标准见表1^[15]。

1.4.4 血清毒性反应实验选取健康雄性SD大鼠20只，随机分为4组，每组5只，3个实验组分别经胃饲nHAC/PLA1、nHAC/PLA2及nHAC/PLA3浸提液10 mL/(kg•d)，阴性对照组给予等量生理盐水，连续给予7 d。采用白细胞介素1定量酶联检测实验动物血清的毒性反应。

1.4.5 致敏实验选取健康白色雄性豚鼠25只，随机分为5组，每组5只：3个实验组分别采用nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3浸提液，阴性对照采用生理盐水，阳性对照采用50 g/L甲醛溶液。实验前24 h，去除豚鼠颈背区毛发，进行皮内诱导：消毒后在脊柱两侧各选择3个点，各点间隔2 cm，从头至尾成对皮内注射各0.1 mL，其中靠近头部的2点注射A液(完全弗氏佐剂与生理盐水的等体积混合液)，中间2点注射B液(实验组材料浸提液、阴性对照组生理盐水、阳性对照组甲醛溶液)，靠近尾部的2点注射C液(A液和B液的等体积混合液)。

局部诱导：皮内诱导后第6天，各注射点采用10%十二烷基硫酸钠石蜡液，按摩导入皮肤，24 h后将浸透B液的敷贴片局部覆于每只动物诱导注射点上，用封闭式包扎带固定48 h后去除。

激发阶段：局部诱导结束后第13天，去除豚鼠腹部被毛，去毛24 h后，贴敷浸透C液的敷贴片，用封闭式包扎带固定24 h后去除，于24，48，72 h观察每组豚鼠激发部位皮肤的红斑、水肿等反应，分无、极轻微、轻微(局限性)、中度和严重5等级(0-4分)^[16]。

1.4.6 溶血实验取健康新西兰白兔1只，经耳中动脉采血10 mL，制备新鲜的抗凝兔血，与生理盐水按体积比4∶5比例稀释备用。取离心管5支，3个实验组分别加入nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3浸提液10 mL，阴性对照组加入10 mL生理盐水，阳性对照组加入10 mL蒸馏水，37 ℃恒温水浴30 min后，各组加入稀释兔血0.2 mL，37 ℃恒温水浴60 min。每组设3个平行组。将所有离心管放入离心机中，1 000 r/min离心5 min，取上清液转移至比色皿中，紫外分光光度仪于545 nm 波长处测定吸光度，计算溶血率^[17]。溶血率(%)=(实验组吸光度-阴性对照组吸光度)/(阳性对照组吸光度-阴性对照组吸光度)×100%，溶血率大于5%为有溶血现象。

1.5 主要观察指标  nHAC/PLA材料的细胞毒性、急性全身毒性、血清毒性、致敏反应及溶血率。

1.6  统计学分析所得数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，各组间吸光度值、小鼠体质量变化量及血清白细胞介素1定量酶联检测结果比较均采用方差分析。检验水准α=0.05。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

聚乳酸及其复合物是国内外临床应用最多的可吸收材料之一^[18-20]。单纯聚乳酸强度差、脆性大，降解过程中的产酸易引起周围组织无菌性炎症，且X射线下不显影^[21-22]，但与其他材料易于加工成型，可制备出不同性能的复合材   料^[23]。纳米羟基磷灰石/胶原是以提纯并去抗原的Ⅰ型胶原为模板，在钙-磷盐溶液中调制晶粒度低、晶体尺寸在纳米量级的含碳酸根羟基磷灰石矿化、具有模仿天然骨组成成分和分级结构特征的复合体^[24]，但其脆性大、不易成型。国内团队将5%聚乳酸与纳米羟基磷灰石/胶原复合制备了nHAC/PLA，发现人成骨细胞易于在其表面附着与生长，可用于组织工程骨架材料研发^[8]。将不同比例的聚乳酸与纳米羟基磷灰石/胶原复合，可获得不同强度与韧性的生物可吸收材料。牙齿与骨骼组成成分接近，强度有所不同，因此为研制可应用于临床的乳牙生物可吸收根管桩，课题组制备了含聚乳酸100，150，200 g/L的nHAC/PLA可吸收材料(nHAC/PLA1、nHAC/PLA2、nHAC/PLA3)，并参照ISO 10993-1标准对材料能否植入机体进行生物安全性评价^[11]。

细胞是人机体的基本单位，细胞毒性评价是医疗器械生物学评价系列标准(GB/T 16886)中一项最基本的评价项^[25]，是模拟生物体生长环境，检测生物材料或器械接触机体组织后生物学反应的体外实验。随着细胞培养技术的提高，人们对体外细胞培养评价材料生物相容性的要求更高，对细胞毒性实验的检测也有多种方法^[26-28]。此次研究中细胞毒性实验采用MTT法^[29]，通过酶联免疫检测仪测定细胞吸光度度，判断其增殖率，评估细胞毒性均为0级，明确了这3种nHAC/PLA材料均具有良好的细胞安全性。

通过尾静脉注射途径是材料与C57小鼠体内接触最直接和快速的一种方式：浸提液直接进入小鼠血液循环，材料如果存在有毒物质，小鼠可较快出现各种不良反应，从而评估生物材料的急性毒性作用^[14-15]。此次实验中，小鼠尾静脉注射材料浸提液后未出现全身毒性反应，充分表明制备的nHAC/PLA材料不引起急性毒性反应。

白细胞介素1是白细胞介素的一种，在免疫信息传递、激活与调节中起着重要作用^[30]。血清白细胞介素1蛋白量的增高提示免疫细胞活化、免疫反应增高。3种nHAC/PLA浸提液经胃饲7 d后，SD大鼠血清白细胞介素1蛋白量与对照组不存在统计学差异，表明3种nHAC/PLA材料在此次实验中经胃肠道是相对安全的，无血清毒性，在短期内不会引起全身免疫反应。

复合材料可能存在残留单体或低分子物质，这些可作为半抗原与皮肤蛋白质结合后形成完全抗原，诱发皮肤过敏反应。如果材料皮肤致敏实验阳性，那么就不可植入体内。此次实验中实验组豚鼠激发致敏反应与阴性对照组一致，皮肤未出现红斑和水肿现象，这证明研制的nHAC/PLA材料不引起皮肤致敏反应，可进一步进行体内植入实验。

nHAC/PLA作为可植入体内的材料可能会与血液接触。溶血实验是鉴定血液相容性的最基本方法之一，它可灵敏地测定材料与血液接触后红细胞裂解释放的血红蛋白量，以此判断材料的体外溶血程度^[17]。按照ISO牙科材料生物学评价标准推荐方法，此次实验采用浸提液法，材料浸提液直接与稀释兔血在一定时间接触，nHAC/PLA1、nHAC/PLA2和nHAC/PLA3浸提液的溶血率均低于5%，即认为材料无溶血反应，完全符合医用生物材料的应用要求。

综上实验，此次实验生物学检测结果表明，3种nHAC/PLA材料均具有良好的短期生物安全性，这可能与材料化学组成中不存在明显对机体有毒有害的物质有关。对于材料能否适用于乳牙根管桩的制作，还需要进行长期的体外实验及动物体内实验，进一步验证其长期的生物安全性、降解性能及力学性能。
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纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合材料：聚乳酸是一类可降解的高分子生物材料，具有良好的生物相容性、生物可降解性、无毒副作用、易加工成型，且降解产物能参与到人体的新陈代谢，但强度差，在降解过程中产酸易引起周围组织无菌性炎症，且X射线下不显影；纳米羟基磷灰石/胶原是具有模仿天然骨组成成分和分级结构特征的复合体，具有良好的生物活性和骨传导性，且无毒无免疫原性，但其脆性大，不易成型；两者的复合可提高纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合材料的相关性能，但其生物相容性和安全性还需深入探究。

生物安全性：是评价一种新生物材料性质的重要指标之一，是生物材料在临床应用之前必须进行的关键环节，是指材料与人体之间相互作用下必须对人体无毒性、无致敏性、无刺激性、无遗传毒性、无致癌性，对人体组织、血液、免疫系统无不良反应。
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骨组织工程的复合材料及混合比例的选择，对材料的强度、韧性影响巨大，课题组前期研究将一定比例的聚乳酸与具有模仿天然骨组成成分和分级结构特征的纳米羟基磷灰石/胶原复合，成功制备了不同混合比例的纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型材料，对该新型材料进行生物安全性评价，结果证实纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸新型材料均无细胞毒性、急性全身毒性、血清毒性、致敏性和溶血性，具有良好的生物安全性。
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Short-term biosafety of novel absorbable nano-hydroxyapatite/collagen/poly(lactic acid) composite

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